ชนิดของสารที่เอนไซม์ไปควบคุมปฏิกิริยา เอนไซม์แต่ละตัวทำงานเฉพาะสับสเตรตหนึ่งๆ เท่านั้น จะไม่ไปเกี่ยวข้องกับสับสเตรตอื่นๆ

ความเข้มข้นของสับสเตรต

- เมื่อเอนไซม์คงที่ ถ้าเพิ่มความเข้มข้นของสับสเตรตจะทำให้อัตราเร่งปฏิกิริยาเพิ่มขึ้น จนถึงจุดๆ หนึ่งแล้วคงที่

- ถ้าความเข้มข้นของสับสเตรตเข้มข้นเกินไป จะทำให้เอนไซม์หยุดการทำงานได้

ความเป็นกรด-เบสของสารละลาย

- เอนไซม์จะทำงานได้ดีที่สุดสำหรับค่า pH ค่าหนึ่ง

- ถ้าเปลี่ยน pH เล็กน้อยอาจจะทำให้อัตราการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์ลดหรือเพิ่มขึ้นได้

- ส่วนใหญ่อยู่ในช่วง pH 6 - 7.5

อุณหภูมิ

- การเพิ่มอุณหภูมิมีผลต่อปฏิกิริยาที่เร่งเอนไซม์ทั้งทางบวกและทางลบ

- การเพิ่มอุณหภูมิก็จะทำให้เอนไซม์ ซึ่งเป็นโปรตีนเปลี่ยนสภาพเดิมของมันได้ง่าย

- อุณหภูมิที่พอเหมาะอยู่ในช่วงอุณหภูมิ 25–40 องศา

ความเข้มข้นของเอนไซม์ สับสเตรตประมาณหนึ่งนั้น ต้องใช้เอนไซม์ประมาณพอเหมาะ ถ้าเอนไซม์มากหรือน้อยไปก็จะทำงานได้ผลไม่เต็มที่

สารกระตุ้น (Activator)